Практическая работа № 10. Действие ферментов на различные вещества.

Опыт 1. Действие амилазы слюны на крахмал.

1. Предварительно прополоскав рот, набрали 2-4 мл слюны и поместили в маленький мерный цилиндр. В цилиндр добавили воды, доведя объем до 10 мл.

2. Смешали 5 мл раствора крахмала с 1 мл раствора фермента в маленькой мензурке. Через 30 с после перемешивания взяли каплю полу

ченного раствора и проверили ее на содержание крахмала, перемешав её с каплей раствора йода на предметном стекле. Если крахмал еще присутствует, то необходимо проверять раствор через каждые 30 с до тех пор, пока крахмал станет необнаруживаем. Записали общее время, необходимое для полного гидролиза крахмала.

3. Вновь смешали 5 мл раствора крахмала с 1 мл раствора фермента и разделили полученный раствор поровну в 2 пробирки. Одну из пробирок поместили в стаканчик с холодной водой (≈35-40 ^оС). Каждые 30 с отбираем по 1 капле смеси растворов из каждой пробирки и смешиваем на предметном стекле с каплей йода до тех пор, пока крахмал станет необнаруживаем. Записали в каждом случае общее время, необходимое для гидролиза крахмала. Делаем вывод, что амилаза наиболее эффективна при температуре 35-40 ⁰С (температуре тела).

Опыт 2. Действие дегидрогеназы на метиленовый синий (стиральная синька)

1. Небольшое количество аптечного формалина (с учетом его исходной концентрации) развели водой до получения 0,5%-ного раствора формальдегида.

1. В 2 пробирки налили по 5 мл некипяченого молока, добавили по 15 капель 0,5%-ного раствора формальдегида и по несколько капель раствора метиленового синего. Наблюдаем, что краситель постепенно бледнеет и в конце концов обесцвечивается. Это объясняется тем, что благодаря содержащейся в молоке дегидрогеназе атомы водорода формальдегида присоединятся к молекуле красителя.

3. В каждую пробирку добавили немного растительного масла, чтобы изолировать полученную смесь от воздуха и предотвратить окисления красителя.

4. Одну пробирку поставили в пустой стаканчик, а другую в стаканчик с теплой водой (≈35-40 ⁰С). Наблюдаем, что в пробирке, помещенной в воду, краситель обесцвечивается быстрее, чем в первой (т.к. наиболее эффективна дегидрогеназа в условиях, близких к температуре млекопитающих).

5. С помощью резиновой груши и стеклянной трубки через реакционную смесь продули воздух, наблюдаем восстановление цвета красителя (происходит его окисление).

Опыт 3. Действие каталазы на перексид водорода

1. В 5 пробирок налили по 2 мл раствора пероксида водорода.

2. В первую пробирку опустили кусочек сырого мяса. Наблюдаем выделение пузырьков газа. К отверстию пробирки поднесли тлеющую лучинку, наблюдаем вспыхивание и горение лучинки.

3. Во вторую пробирку опустили кусочек сырого картофеля и поднесли тлеющую лучинку. Вновь наблюдаем выделение пузырьков газа и вспыхивание лучинки.

4. В третью пробирку опустили измельченный на терке картофель и поднесли тлеющую лучинку. Наблюдаем более интенсивное выделение газа, т. к. реакция катализируется, каталазой содержащейся в клетках не только поверхности одного куска, их стало больше (увеличилась площадь поверхности).

5. В четвертую и пятую пробирки опустили по кусочку вареного мяса и картофеля. Ничего не происходит, т.к. при варке ферменты разрушаются и не катализируют реакцию разложения пероксида водорода.